《101真狗》围绕着罗杰和安妮塔夫妇以及他们的宠物斑点狗彭哥和佩蒂展开。彭哥和佩蒂相爱后，佩蒂生下了一窝可爱的小狗崽。然而，邪恶的库伊拉觊觎这些斑点狗的皮毛，企图将它们偷去制作皮草。她雇佣了两个笨手笨脚的小偷，趁夜偷走了小狗们。罗杰和安妮塔心急如焚，彭哥和佩蒂也踏上了营救小狗的冒险之旅。一路上，它们得到了许多动物朋友的帮助，克服了重重困难。最终，在大家的共同努力下，不仅成功救回了自己的小狗，还解救了被库伊拉囚禁的其他 84 只斑点狗，让 101 只斑点狗都重获自由，库伊拉也受到了应有的惩罚。