《新乌龙院之笑闹江湖》围绕乌龙院展开了一系列搞笑故事。长眉师父（吴孟达 饰）带着小文（郝劭文 饰）、阳光（新七小福 饰）等一众徒弟在乌龙院过着简单又欢乐的生活。然而平静被打破，黑道大哥阿威（王宁 饰）为了寻找失踪的女儿小萱（张子栋 饰），绑架了长眉师父。小文和阳光等人决定下山营救师父。下山后他们结识了神秘少女蕊蕊（程砚秋 饰），一起踏上冒险之旅。一路上他们遭遇各种奇葩人物和搞笑事件，比如在客栈与一群恶霸斗智斗勇，闹出不少笑话。最终他们凭借智慧和勇气不仅救回师父，还解开了小萱失踪的谜团，而乌龙院也恢复了往日的欢笑。